O kit de teste MTB/MDR (Sanity 2.0) (abreviatura: Sanity-2 MTB/MDR) é um kit de teste baseado em cartucho para detecção qualitativa do complexo Mycobacterium tuberculosis (MTBC) e mutações de resistência a múltiplas drogas (incluindo mutações resistentes à rifampicina e isoniazida -mutações resistentes) emMycobacterium tuberculose(MTB) de amostras de escarro.Este kit foi projetado para funcionar no Sanity 2.0, que integra extração de ácido nucleico, reação em cadeia da polimerase em tempo real (rt-PCR), análise da curva de fusão e interpretação dos resultados em um instrumento totalmente automático (máquina tudo-em-um).

Princípio

O Sanity-2 MTB/MDR usa reação em cadeia da polimerase em tempo real (rt-PCR) baseada em sonda Taqman para detectar qualitativamente o gene IS6110 que é específico para MTBC, bem como um controle interno não humano (gene SUC2 de Arabidopsis thaliana).

Ao mesmo tempo, o Sanity-2 MTB/MDR emprega sondas duplamente marcadas para atingir o excesso de amplicons de fita simples gerados por PCR assimétrica;em seguida, usa a análise da curva de fusão para gerar a derivada negativa da intensidade de fluorescência versus temperatura e compara a temperatura de fusão (Tm) para obter informações de mutação das sequências.Onde, a combinação perfeita da sequência alvo e da sonda dá o Tm mais alto;parcialmente incompatíveis, por exemplo, mutação pontual, inserção ou deleção, causariam Tm menor do que a combinação perfeita.O grau diminuído está relacionado ao tipo de mutação pontual, número base de inserção ou deleção, bem como à localização da mutação.O Sanity-2 MTB/MDR cobre as mutações de rpoB (códons 507~533) para determinar a resistência da rifampicina;as mutações da região promotora ahpC (posições -44~-30 e -15~4), região promotora inhA (posições -17~-8) e códon katG 315, para determinar a resistência da isoniazida.

Marcação CE-IVD